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青霉素殘留elisa試劑盒操作流程

更新時間：2020-06-11 點擊次數(shù)：1846次

　　青霉素殘留elisa試劑盒可用于定性、定量檢測動物組織（肌肉、肝臟、魚、蝦等）、蜂蜜、牛奶、奶粉、冰淇淋、奶油和疫苗樣本中青霉素的殘留量。

　　試驗原理：本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法，在酶標板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中殘留的青霉素和酶標板微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗青霉素的抗體，加入酶標二抗后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光度值與其所含殘留物青霉素的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較，再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中青霉素的殘留量。

　　青霉素殘留elisa試劑盒操作流程如下：

　?。?）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

　　（2）酶標板置4℃，包被過夜。

　?。?）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

　　（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

　?。?）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　　（6）洗板，同（4）。

　　（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

　?。?）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　?。?）洗板，同（4）。

　　（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

　?。?1）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

　?。?2）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　　（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

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